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【构建造模实验动物模型选择与饲养代养动物寄养服务注意事项】

发布时间:2022-09-12 12:42:09  来源:构建造模实验动物模型选择与饲养代养动物寄养服务注意事  浏览:   【】【】【

构建疾病实验动物模型选择与饲养代养动物寄养服务注意事

做动物实验,首先要做的事就是养好实验动物,这是动物实验成功的基石。做好动物实验的第一步看似很简单,但是在饲料、饮水及及生活环境有不少需要注意的细节。

第一、实验动物的选择要点

1. 怎么选择合适实验动物?

1)参考《医学实验动物学》,书中比较详细地介绍了常用实验动物的解剖生理、生物学习性等等,最主要的是它为你选择什么样的实验动物提供了重要的参考。因此,系统学习或者零星地翻阅《医学实验动物学》是保证合理选用实验动物的基础之一。

2)参考大量文献,参考别人是如何选择的,再结合自己对实验动物的了解。如:做高血脂、动脉粥样硬化,大多数会选择大鼠、兔子,也可以选金黄地鼠、鹌鹑,少数会选小鼠。

2. 采取什么样的方法造模?

1)参照《药理实验方法学》,此书重点突出了与药理学研究密切相关的实验方法与技术,如药理实验设计、实验动物的选择、实验动物模型的建立与评价、实验指标的选择、量效一时效关系、安全性评价、细胞培养技术以及与药理作用有关的机制研究的方法与技术等。

2)参照文献。造模方法有时候也决定你的实验动物选择,

3. 多去了解一下实验中可能出现的问题。要对整个实验过程有全面的计划,并对可能出现的问题有应对的措施。有不少人做实验时根本没有考虑可能出现的失误,因而在实验出现问题时茫然无措。即使是造同样的疾病模型,不同的动物表现可能有不一样的地方。要对这些问题有充分的了解,并要进行必要的预试。还要了解动物的习性,进行必要的护理。

构建疾病实验动物模型选择与饲养代养动物寄养服务注意事

第二、如何辨别实验动物的雌雄

辨雌雄的目的就是为了分笼饲养,避免雌雄同笼而交配,无法进行实验。那么如何辩别?当然是看生殖器了。一般像狗,猴等大动物比较容易辨别;如:小鼠、大鼠、兔中小体型的动物则稍微难辨别,这时候可以用下列方法来辨别:

1. 看肛门与生殖器之间的距离:雄性隔得远,雌性隔得近。雄的生殖器与肛门间有阴囊,不过幼龄时不太明显。

2. 针对幼龄的动物而言,雄性阴茎朝头的方向突出,可轻轻挤压包皮使其露出而确认。雌性较小时可见闭合的阴道口,挤压亦可张开。像兔、豚鼠等,阴茎短小,故较难辨认,最好是挤压生殖器以确认,生殖器处呈O型者,为雄性;生殖器处呈V型,下端裂缝延至肛门者,为雌性。


3. 看乳头或睾丸。成年的动物比较好辩认,雌性有乳头,雄性有睾丸。幼龄动物其乳头、睾丸并不是那么明显的。

第三、实验动物的适应性饲养

所谓适应性喂养,是指实验动物由繁殖地或供应商处搬到实验动物房以后,在实验之前,为了使之适应环境而喂养几天的过程。这一过程非常重要,但往往不受人重视。这一过程一般至少为期三天,最好是一周。

怎样使之适应?

1. 配置好饲料、饮水、垫料,做好通风,12h-12h明暗交替。努力使之在“新家”舒服地过好日子。

2. 密切观察其毛发、排泄物、活动情况。这是考察动物是否有病的外在表现。

3. 注意与实验室原有饲养的动物隔开一定的距离。其它动物的声音、排泄的氨对新来的动物有一定的影响。如发现动物有个别状态不佳者,应立即隔离,并分析原因;有三分之一以上状态不佳者,高度怀疑动物有疾病;有死亡者,高度怀疑此批动物有问题。
在此期间发现动物有病者,应更换别的批次动物。若是实验动物体重尚达不到实验所要求,可适当延长适应性喂养的时间。

第四、实验动物的饲料

普通饲料:

1. 小鼠、大鼠的饲料。小鼠、大鼠的饲料为全价饲料,即不需要再添加任何营养成分。

2. 豚鼠、兔子的饲料。豚鼠、兔子饲料不是全价饲料,在饲料之外,需要加少许青菜或青草,否则有的状态不佳甚至死亡。

用量:对于小鼠,每日的饲料在4~8g,大鼠在15~20g;豚鼠在15~30g;兔在30~80g。需要注意他啮齿类动物行为——喜欢咬东西。因为它们的牙齿终生生长,于是它们要磨牙,这样,投予过多饲料它们也会浪费掉。兔虽属兔型目,但有类似啮齿目动物的行为。

特殊饲料:

1. 高脂饲料

常用配方:

组分 百分比
猪油 10%
鸡蛋黄 5%
胆固醇 1~2%
丙基硫氧嘧啶 0.2%
普通饲料 82.8~83.8%

另可酌加胆酸盐、维生素D3等

具体步骤:

1)将胆固醇、丙基研细,二者充分混合;

2)鸡蛋煮熟,剥取蛋黄,捏碎,吹干,研成细粉,与前二者混合好;

3)如要加胆酸盐、维生素D3,亦将其混合好。

4)以“等量递增法”将上述药料加入到普通饲料粉末中;

5)将猪油化开,喷洒在饲料粉末之中混匀;

6)喷适量水为黏合剂,加到制粒机中制成棒状饲料。

在此,特别提出“等量倍增法”。因上述造模药料与普通饲料的量相差悬殊,直接加入其中是难以混匀的,这样会造成以后动物摄入的造模的胆固醇,甘油三酯差异大,不利于实验。而所谓“等量递增法”就是:将上述药料与差不多相等的普通饲料粉末充分混匀;得到混合物后,再加与此混合物相等量的普通饲料混合,充分混匀;如此类推。例如:药料为200g,那么普通饲料也为200g,第一次混合后总重量即为400g,第二次混合即加入400g普通饲料,混合后总重量为800g,以此继续混合下去,这样就成倍地混合好。

如果饲料没配好,实验可能前功尽弃。因此高脂饲料要亲自配,且按要求、按科学规律配(等量递增法)。饲料成形后,要摊开置通风处吹干,或以电风扇吹干,不要受热,尤其在春夏之季,因其中含有脂肪油类,且因制饲料时要经过高温压制,放在一起易发热、生霉。

一次配制饲料不宜过多,一般可配制实验全程所需饲料的一半,后半段根据前面所消耗的实际量来酌性增减,但需给足量,宁多一点,不能少。高脂饲料比普通饲料要软、易碎,要注意轻拿轻放,底部碎屑可收集起来,再压制成型。

2. 低铁饲料

组分 百分比
酪蛋白 20%
玉米淀粉 65%
玉米油 5%
纤维素 5%
混合盐 4%
混合维生素 0.5%
氯化胆碱 0.5%

3. 缺锌饲料

组分 百分比
葡萄糖 51%
蛋清粉(EDTA提取) 30%
玉米油 6%
非营养性纤维 4.25%
无机盐混合物 3.55%
维生素混合物 5%
氯化胆碱 0.2%

第五、实验动物的饮水

实验动物级别的不同,饮用的水也不同。通常情况下,普通级动物饮水达到生活饮用水标准即可;清洁级、SPF要求灭菌,可高温高压灭菌,也可以加次氯酸钠,或以盐酸调PH到2.5~3.0,后者又称之为酸化水;无菌动物饮水只能高温高压灭菌。
饮水管理注意事项:
1. 装水时,不可装到全满,否则因大气压的原因,水出不来。
2. 勤换水。最好是每天一次。换水时,要清洗瓶身内部及瓶嘴。因动物喝水时,可将口中的微生物回送至瓶内,尤其是在瓶嘴内面。
3. 一般水瓶要消毒后再使用。

4. 要注意是否漏水。漏水则有可能将动物淹死(主要是小鼠)。盖好瓶塞后,一定要看一看。确认无事方可离开。

第六、实验动物的笼具


随着时代的变迁,笼具不断发生变化。新中国成立之初,有时候用陶罐作为动物的笼具,而现在越来越多先进的笼具被应用到科研中,如运输笼、繁殖笼、具有独立送风系统的笼具(IVC)等等。还有通过信息技术将现有IVC笼具进行信息化改造,结合物联网RFID技术、网络技术和数据分析技术实现动物饲养的便捷化、智慧化管理,可实现对笼位的在线管理。完全实现饲养的信息化。

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第七、实验动物的垫料

所谓垫料是指垫于笼具底部用于动物保温、吸水、做窝等作用的物质,目前所用的大多数垫料是家俱厂的刨木花。
1. 要注意刨木花的种类。不是所有的木材形成的刨木花都可以做垫料。松树等针叶林类的刨木花多含芳香类物质,对肝药酶有一定的影响。进而影响到药物的生物利用度、生物转化等。对实验结果产生无形的影响。
2. 要注意其片型大小。太大或太碎的都不行。太大则笼具底垫不匀,太小则容易引起动物的肺部疾病或不适。因目前垫料生产不规范,多为家俱厂副产品。有的里面竟会有些小的木头,有的还有厂家的生产计划等废弃资料,有的有大量很细的锯屑。这些细的锯屑易产生扬尘,影响动物的呼吸系统。
3. 吸水程度。垫料主要是给动物一个生活的微环境,有一定的保温作用,同时也起到吸收粪便中的水分的作用。通常决定什么时候要更换垫料就是看其被尿浸湿的程度。从某种意义上来说,垫料即是动物的“尿布”,只是比尿布的功能更多一点而已。
4. 是否消毒。按规定,垫料都是要消毒的。因为其中可能有昆虫,微生物等。而动物的粪便等混在垫料中,加之适宜的温湿度,将会成为微生物等良好的滋生场所,所以要消毒。

第八、实验动物的饲养环境
动物房最基本的要点:温湿度控制、做好换气、尽量减少粉尘、及时换垫料。此外,除称重、给药等基本操作外,不要在动物房进行手术等其它实验操作。
下图所示为清洁级动物房的设计示意图。其主要原则是:人流与物流分开,即人员进出通道与动物、饲料等其它物品的通道分开;逐级控制,主要是控制空气中的粉尘及菌落数。


第九、实验动物的护理

在药物造模或手术之后,动物往往会有一个危险期。这一时期需要精心护理。如有不慎,则可能造成死亡,或者状态不佳,影响后续实验的进行。
1. 术后可能的感染及其应对措施。术后一般要保温24小时,必要时可注射青霉素等抗生素。如果本身就是造成感染模型,用药物干预看其效果的话,则不能用除干预药物以外的抗生素了。
2. 造模后的危险状态及其应对措施。例如:糖尿病模型的前三天,糖尿病造模后有一个低血糖时相,是因为胰岛大量破坏后,释放出大量胰岛素至血中,引起低血糖。必要时要使动物加葡萄糖,使之渡过危险期;急性肾衰模型,或一侧次全切除的慢性肾衰模型等,都要密切观察。总之,影响肝、肾、脑、心等重要器官的急性造模的动物,需要多加注意。
3. 密切监测。动物出现状态不佳基本上是两种原因。一是动物本身的体质。有的动物在搬进实验动物房后,由于适应性的问题,可能出现体质有所下降。二是造模后形成的。多数动物实验是要造模的,造模是人为地引起疾病,对动物的损伤较大。因此,日常的监测是不可少的,有的只需观察,有的要采取一定的措施,如:隔离观察、抗感染。


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