【北京专业基因克隆检测细胞DNA基因测序实验外包技术服务】

北京专业优质基因克隆检测细胞DNA基因测序实验外包委托技术服务

基因克隆作为最基本的分子生物学手段广泛应用于目的蛋白的表达、构建表达载体等实验。晨晔生物提供成熟、高效的基因克隆服务。主要服务内容如下：
基因钓取：为客户从相应文库中钓取所需的基因。
基因克隆：为客户将目的基因克隆到T载体上。 按照客户要求，进行特定的基因克隆服务
服务说明
1. 客户提供样品组织、细胞或其DNA/总RNA。
1) 实验材料必须保证新鲜，请您采样后立即放入液氮中速冻。
2) 基因组DNA/总RNA无明显降解，总量大于5 mg。请您提供尽量多的材料。

提供结果
实验报告（包括具体实验步骤、照片等)、测序彩色波形图、测序方向图、序列碱基图、酶切位点图、保存电子版结果、含有目的基因的质粒及穿刺菌保（或PCR产物)、引物等。

TA克隆技术（TA cloning）利用Taq聚合酶具有末端转移酶（TdT）活性，但却不具有3'-5'端外切酶校准活性的特点，可在PCR产物的3'端加上一个非模板依赖碱基“A”。所以TA克隆不需使用含限制酶序列的引物，不需将PCR产物进行优化，不需把PCR产物做平端处理，不需在PCR扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。TA克隆是目前克隆PCR产物简便、快捷的方法。拥有成熟的技术和完善的服务流程，能完成任何复杂、即用的TA克隆服务。我们可以根据客户需要，将客户提供的PCR产物连接到pMD18-T载体中，进行转化，筛选，测序等一系列实验，帮您从根本上提高科研工作效率。

服务流程：
1. 检测样品DNA长度和浓度。
2. 加“A”尾巴（若PCR产物已有“A”尾巴则无需此步骤）
3. PCR产物与载体连接
4. 转化并筛选重组子
5. 重组子测序
6. 测序结果分析
7. 重组质粒纯化

拥有人、小鼠、大鼠等多个物种约10万个cDNA克隆，是当前数量完备的基因库。为了方便科研人员的搜索与查询，我们尽可能对这些cDNA克隆进行描述，包括NCBI序列号、别名、CDS区、氨基酸序列及克隆载体等，旨在为客户提供优质、快捷的服务！每一个ORF克隆的插入片段都进行了全长测序，能够保证氨基酸序列与GenBank中相应克隆的参考氨基酸序列一致。

cDNA克隆的一般实验过程：

1、提取总RNA，并分离mRNA
2、逆转录PCR，合成cDNA双链
3、制备载体，并连接cDNA双链和载体
4、质粒转化
5、快速鉴定、菌落PCR
6、cDNA 文库的扩增和建立

DNA分子中由于发生碱基对的增添、缺失或改变进而引起基因结构的改变，称为基因突变。定点突变 （mutagenesis）是通过PCR等方法向目的DNA中引入突变，包括碱基的添加、删除、点突变等。该技术能迅速、高效地改变DNA所表达的目的蛋白的性状及表征，是研究蛋白质结构和功能之间复杂关系的有力工具，也是研究人员在实验室中改造、优化基因常用的一种非常有用的手段。目前，由PCR介导的定点突变相比于其他突变技术具有周期短、成功率高、不受酶切位点限制等优点，是使用最普遍的定点突变方法。

实验流程：
1：设计突变引物
2：PCR扩增进行突变实验:
3：突变产物克隆到您所需要的载体上
4: 测序验证突变成功
5:提交详细的实验数据、实验报告及突变后的质粒和保存菌
提交的产品和资料：
1. 实验操作过程，突变用引物序列；
2. 冻干后的测序质粒及含有改质粒的穿刺菌保；
3. 详细实验报告，包括突变基因测序报告。