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推荐优质过表达干扰慢病毒腺病毒逆转录病毒包装技术服务

发布时间:2020-11-24 16:22:09  来源:推荐优质过表达干扰慢病毒腺病毒逆转录病毒包装技术服务  浏览:   【】【】【

腺病毒包装原理

腺病毒(Adenovirus)是一种线性双链DNA无包膜病毒,对分裂期细胞和非分裂期细胞均具有感染能力,且具有嗜上皮细胞性。重组腺病毒载体是以腺病毒为基础发展起来的工具病毒载体,具有宿主范围广,免疫原性强,基因容量大,不与基因组整合,瞬时表达等特点。

重组腺病毒(AdV)是人血清5型腺病毒(Ad5),一种复制缺陷的腺病毒载体系统,在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。腺病毒缺失了早期表达基因序列E1和E3区。E1是腺病毒复制所必须的,E1的缺失使其不能自身复制,只能依靠包装细胞如293A细胞提供的反式互补进行复制扩增,以此保证腺病毒的安全性。

至善研究院所提供的腺病毒颗粒经过超速梯度离心和过滤,并通过壳蛋白免疫法进行滴度测定。腺病毒的滴度在10^10~10^12pfu/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。

慢病毒具有广泛的感染谱,可以有效感染分lie期和静止期的细胞,并且能够长期稳定表达外源基因,因而成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、基因干扰以及活体动物实验中。
服务内容:慢病毒包装的基因涉及常规的蛋白编码基因及非编码基因,比如:miRNA、lncRNA以及circularRNA等的过表达及干扰的慢病毒包装服务。
腺病毒慢病毒包装服务实验流程
a. 慢病毒过表达质粒载体的构建: 根据目的基因序列设计特异性扩增引物,采用高保真PCR技术从模板中调取目的基因CDS区连入核心载体。
b. 慢病毒干扰质粒载体的构建:合成目的基因的siRNA序列,退火成双链,然后连入慢病毒干扰质粒载体。
c. 非编码基因过载体构建:从模板中调取基因相应的miRNA前体, 然后连入慢病毒核心质粒(miRNA以基因组为模板,lncRNA和circularRNA根据需要可以用cDNA或基因组为模板)。
d. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化: 核心质粒和辅助质粒进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,转染后8h 更换为完全培养基,培养48和72h后,分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清,病毒上清液通过超离心浓缩病毒。
腺病毒慢病毒包装服务流程:
腺病毒慢病毒包装客户须知
1、适用于在难以转染的细胞中进行的基因过表达或干扰研究,如原代神经细胞,干细胞,肿瘤细胞等;
2、适用于快速建立稳定表达的特定基因细胞株;
3、适用于In vivo 实验,包括稳定表达细胞株成瘤实验、局部注射、活体动物的基因过表达或干扰等。

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