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优质生物医学小鼠皮下肿瘤荷瘤实验外包代做技术服务

发布时间:2020-10-15 20:11:29  来源:专业分子生物实验外包公司医学科研实验外包国自然课题整体动物实验外包app/ps1双转基因小鼠价格优惠db/db小鼠Samp8小鼠原理背景模型构建现货购买SCI英文论文润色翻译期刊投稿发表信息服务平台  浏览:   【】【】【


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小鼠皮下肿瘤荷瘤实验细胞准备

1.     不同的细胞成瘤能力不同,在选择时应根据实验目的和具体情况综合考虑。如乳腺癌细胞系MCF-7虽然经常用于体外实验,但成瘤虑差,生长慢,因此一般不考虑。

2.     一般分为鼠源的和人源的细胞系,鼠源的一般更容易成瘤,但人源的更贴近人类肿瘤生长情况。

3.     取冻存于液氮的肿瘤细胞复苏并扩增,确保肿瘤细胞的活力和较好的生长状态。一般鼠源肿瘤细胞接种2-100万/只,人源的细胞系需要200-1000万/只以上。可结合细胞和裸鼠的实际情况,最高可以注射1000万/0.1ml,不可再高,因为细胞几乎达到饱和状态。

注意计算好细胞用量,一般要多准备5只裸鼠左右细胞用量。

小鼠皮下肿瘤荷瘤实验裸鼠准备

一般选择5-6w龄的裸鼠,太小死亡率太高,太大免疫力会增强,不易成瘤。如无特殊要求雌雄均可。

接种步骤

1.     胰酶消化细胞,计数后将其重悬于生理盐水中

2.     选择进针部位(一般选择腋下或腹股沟等血管丰富的部位),用酒精棉球擦拭进针部位

3.     向前方穿行,注射前针头左右动一下,若无阻力则证明在皮下,否则可能在皮内或肌肉里面

4.     缓慢推注,一般体积为100-150μL,注射完后缓慢拔出针头,可在注射部位看到明显的鼓包

5.     接种点离进针点尽量远一些,防止漏液和污染

结果处理

一般接种5天后即可看到肿瘤出现,根据实验要去的生长天数,达到时间后颈椎脱臼处死裸鼠,取出肿瘤,拍照。拍照时需要放置两把直尺,可用于后期计算肿瘤体积。

问题解答:

(1)瘤子长不出来是怎么回事?

一方面可能是细胞状态差,活力不好,或是肿瘤细胞不易成瘤,需加入Matrigel辅助或增大接种量或更换细胞系;一方面可能是小鼠周龄太大,或小鼠免疫排斥,建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠(Nod-scid小鼠,NOG小鼠>Nude裸鼠)

(2)小鼠瘤子长起来又消失?

肿瘤块先缩小,后变大很常见,很可能是炎症反应,肿瘤细胞被小鼠自身吸收,继续观察肿瘤细胞吸收之后是否经过几周还能长出来,长不起来建议换鼠。

(3)均一性很差,肿瘤体积差距较大?

如果荷瘤分组发现小鼠肿瘤体积差距很大,这可能跟小鼠周龄及接种细胞量不一致导致,建议重新做实验分组。

(4)是否可以在一只小鼠进行多个点荷瘤?

不可以,一只老鼠就只能接种一个点。因为一个老鼠身上有多个肿瘤块的情况下,可能会相互影响。

(5)是否应用免疫抑制剂加速肿瘤生长?

如果裸鼠荷瘤不生长,可以参考文献,用免疫抑制剂如环磷酰胺(抑制裸鼠NK细胞活性)促进生长;不过最好不要为了缩短造模周期来加速生长,因为可能会造成溃烂,这样就不得不中止实验。所以一般情况下,应尽量符合细胞系本身的生长特性,不应过多地人为的干扰。


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