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    一、海马侧脑室脑立体定位注射AAv病毒实验外包服务实验目的
    1. 了解脑立体定位技术。
    2. 掌握脑立体定位仪及脑图谱的使用方法。
    二、海马侧脑室脑立体定位注射AAv病毒实验外包服务实验原理
    脑立体定位技术被广泛的运用于脑的损毁、刺激和脑电记录的精确定位中,成为研究脑结构和功能必不可少的工具。脑立体定位技术主要是使用脑立体定位仪作为定位仪器,利用某些颅骨外面的标志(如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢状缝等)或其它参考点所规定的三度坐标系统,来确定皮层下某些神经结构的位置,以便在非直视暴露下对其进行定向的刺激、破坏、注射药物、引导电位等研究,是神经解剖、神经生理、神经药理和神经外科等领域内的重要研究方法。常用的实验动物,如大鼠、小鼠、猫等高等哺乳动物以及鸟类,其均有完全的外耳道,可用(耳棒)来定位。在确定了颅外标记之后,就可按脑立体定位图谱所提供的数据进行定位操作。
    三、海马侧脑室脑立体定位注射AAv病毒实验外包服务实验器材
    脑立体定位注射仪,微操作仪,常规手术器械,钻孔针,纱布,干棉球,酒精,0.4%戊巴比妥钠(麻醉剂,现配现用),生理盐水,1ml注射器,3%双氧水, 小白鼠。
    四、海马侧脑室脑立体定位注射AAv病毒实验外包服务实验步骤
    1.海马侧脑室脑立体定位注射AAv病毒实验外包服务脑定位仪的使用
    1.1 校验仪器
    定位仪经过搬动或长期不用后,使用前需先加以校验。重点是检验电极移动架各滑尺是否保持直角,可用三角板测定各滑尺所成的角度是否是直角;各衔接部与螺丝有没有松动;滑尺是否太松;检查主框两臂的平行情况;最后观察固定头的装置两侧对称程度,小框是否与主框平行。检查仪器无故障后,可进行下列校验性操作:
    (1)将两侧耳杆柱旋松,在主框上前后滑动,然后再按照原规定刻度装好,看两侧耳杆尖是否完全对正。
    (2)取下一侧耳杆,将一侧电极移动架装好,前后左右上下移动各滑尺,使装在电极夹上的金属定位针尖正对耳杆尖的中心,记下各滑尺的刻度读数,再卸下移动架再装上,并按上法测定耳杆尖的部位,记下三个滑尺的读数,反复操作取平均数首先将放置水平的脑立体定位仪上的两个滑道,按实验的要求调节好合适的高度后。
    (3)然后再用水平尺调正好两个滑道的前后、左右水平。这时再把安置在滑道上的手动微推进器按上面的刻度调节垂直。
    1.2 确定脑立体定位零点,小鼠脑定位的系统大致分两种:
    (1) 用耳间线中心定位,首先将两个耳棒尖端在定位仪滑道中间部位彼此相接触(两个耳棒读数相同),旋紧镙丝。然后取下一侧耳棒,另一耳棒不动。调节移动推进器,使校验电极尖端与耳棒尖端的中心点相触,即为A点(即耳间线中心点),并记下刻度值。然后,将推进器水平移动到门齿钩的上方,将门齿钩平面与校验电极尖端相触。这时就定出外耳道中心点与门齿牙板上面上沿之间的水平切面0点,记为H0。这时,动物的前囟和后囟基本处在一个水平面上,相差0-0.1mm。另外,规定耳间线中心点以上为+,向下为-;向嘴侧为+,向尾侧为-。
    (2)用颅骨标志定位(常用前囟),即以前囟为嘴尾侧0点,由前囟向嘴侧为+,向尾侧为-,其它与上面定位方法相同(图示)。
     
    2. 海马侧脑室脑立体定位注射AAv病毒实验外包服务实验内容
    (1)动物麻醉:小鼠,体重20-30g,称重后以0.4%戊巴比妥钠腹腔麻醉注射时必须缓慢,随时注意动物状态。
    (2)小鼠头部固定:将小鼠的门齿固定于脑定位仪上颌固定器,然后把一侧的耳捧推入动物的外道后,使动物的头在处于两滑道正中。再将另一耳捧推入另一侧的外耳道。这时观察两个耳棒的刻度一致后,将两耳棒上的固定螺丝扭紧,在将牙齿固定器上压鼻环压下后扭紧(鼻环、耳棒的松紧度调节适宜为好),这时从各个方向推压动物头部"均不会出现移动。
    (3)开颅钻孔前的备皮:剪去动物头部毛,用2%碘酒及75%酒精棉球作头部皮肤的消毒,沿矢状缝作一3cm长的皮肤切口,分离皮下组织,用双氧水清洁颅骨表面的筋膜及肌肉并剥离,推开骨膜,暴露前囟、人字缝及矢状缝。
    (4)确定标准中线:将金属定位针向下移动到矢状缝上方后,再前后移动定位针,使定位针定位到前囟。
    (5)小鼠海马定位:用定位针在前囟后2mm, 矢状缝旁开2.5mm处定位一点,即为海马的平面位置,然后在此点上用钻孔针在颅骨上钻一小圆孔。
    (6)注射药物:小鼠海马则位于该圆孔下2 mm,将1ml注射器吸入药物安置到MC-5微操作仪上,操作仪器使注射器针头由小鼠脑钻孔处下降2mm时完成药物注射到小鼠脑海马处。
    (7)制作脑组织切片:将小鼠脑制作成切片,显微观察小鼠脑中红染料位置来验证小鼠脑海马中是否定位准确。


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