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【新冠ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠现货购买价格优惠】

发布时间:2021-08-06 20:22:29  来源:新冠ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠现货购买价格优惠  浏览:   【】【】【


ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠品系简称:ICR-Tg(hACE2)小鼠

ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠修饰类型:转基因

ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠背景品系: ICR

ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠相关基因:human angiotensin-converting enzymez-2,hACE2

血管紧张素转换酶2(ACE2)基因位于X染色体,包含18个外显子,编码由805个氨基酸残基组成的I型跨膜糖蛋白。ACE2是羧肽酶ACE的同源物,一种天然的嵌合蛋白,包括2个结构域:类似ACE的N端活性区和类似COLLECTIN的C端区,这样的双重结构域赋予了ACE2上述两种蛋白的功能。


肾素-血管紧张素系统(RAS),在维持机体血压稳态、体液和盐平衡方面起着重要作用,据研究报道RAS的异常激活与心血管和肾脏疾病的发病机制相关。而ACE2的主要作用是将血管紧张素II转换为七肽血管紧张素1-7,达到拮抗血管紧张素II的升压,从负向调节RAS系统。


在SARS研究过程中,科学家发现ACE2不仅具有上述羧肽酶活性而且还是SARS-CoV的功能性受体,发现SARS-CoV是通过其表面的S蛋白和靶细胞的表面受体ACE2结合侵入宿主细胞进行感染。可见ACE2不仅在血压和心功能的调节方面扮演了重要角色,而且还是SARS-CoV的功能性受体。


新型冠状病毒据研究发现也是通过ACE2进行感染的,与SARS-CoV相同,并且检测发现ACE2不仅在肺AT2细胞、食管上皮细胞和复层上皮细胞中高度表达,而且在回肠和结肠吸收性肠上皮细胞中也有高表达。

ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠作为SARS-CoV易感的动物模型,与野生型小鼠相比,经鼻腔接种PUMC01株SARS-CoV后,ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠动物出现典型的间质性肺炎,hACE2转基因小鼠并伴有肾脏、心脏、肝脏、脑组织和胃肠道等肺外组织的损伤(如附图所示),hACE2转基因小鼠在研究SARS发病机制和抗病毒药物的评价具有重作用。


 据研究,SARS.CoV是通过其表面的S蛋白和靶细胞的表面受体 血管紧张素转换酶2(ACE2)结合侵入宿主细胞的,这提示人ACE2 (hACE2)转基因鼠有可能作为对SARS.CoV易感的动物模型,因此 我们进行了hACE2转基因鼠对SARS.CoV易感性的实验研究并利用 此动物模型探讨了SARS的发病机制。 本研究主要包括以下三个部分的实验内容: 1.hACE2转基因小鼠的制备和鉴定:选择小鼠ACE2(mACE2)启动 子驱动的hACE2全长编码序列(Codingsequence,CDS)基因片断, 通过显微注射的方法,制备携带hACE2基因的转基因小鼠。经PCR 中国医学科学院中国协和医科大学博上学位论文检测到4个阳性首建鼠; RT-PCR及NestedRT-PCR结果显示在其中 一个Founder的子代鼠的肺、心、肾和小肠有hACE2基因表达; Realtime—PCR检测此Founder子代鼠转基因的拷贝数,结果显示为单 拷贝转基因小鼠;Westernblot结果显示hACE2蛋白在转基因小鼠的 不同组织包括肺、心、肾和小肠均有表达;免疫组化显示,在转基因 小鼠的肾脏近曲小管上皮细胞、肺脏小血管内皮细胞可见hACE2蛋白 表达;无创性血压监测观察发现,hACE2转基因小鼠的心率、血压与 野生鼠相比未见明显差异;病理组织学检查未发现转基因小鼠心、肺、 肾等器官组织结构异常。 2.hACE2转基因小鼠对SARS--CoV易感性的实验:经鼻腔接种 PUMC01株SARS.CoV后,野生型和转基因小鼠接种SARS--CoV后 均未出现死亡现象。在接种后的第3天和第7天,RT-PCR和免疫荧 光试验(IFA)结果显示,转基因小鼠肺组织上清的病毒载量和病毒 滴度明显高于野生型小鼠(P<O.05);在接种后的第7天,转基因小 鼠的感染率明显高于野生型小鼠(P<O.01);转基因小鼠出现典型的 问质性肺炎,而且伴有肾脏、心脏、肝脏、脑组织和胃肠道等肺外组 织的损伤。而部分野生型小鼠只在感染后第三天出现轻微的间质性肺 炎。通过免疫组化染色,在转基因小鼠的肺脏上皮细胞和血管内皮细 胞及大脑神经细胞可发现SARS—CoV抗原:接种病毒后在部分感染小 鼠的血清中可检测到SARS—CoV特异性的抗体IgG和Igm,但转基因 小鼠抗体阳性率低于野生型小鼠。上述资料表明,hACE2转基因小鼠 对SARS—CoV的易感性明显高于野生型小鼠。 中国医学科学院中国协和医科大学博士学位论文 3.利用hACE2转基因小鼠探讨非特异性的免疫反应在SARS发病中 的作用:应用ELISA的方法,观察到转基因小鼠接种病毒后,肺组织 上清细胞因子IL一6、TNF—位和IFN-1/明显升高;WesternBlot和免疫组 化染色检测到转基因小鼠感染SARS.CoV后肺组织一氧化氮合酶 (iNOS)表达明显增强,阳性颗粒主要位于肺泡巨噬细胞;比色法测 定到转基因小鼠感染SARS.CoV后血浆中NO含量明显增多。 综上所述,hACE2在我们制备的转基因小鼠体内部分组织表达, 尽管接种病毒后具有缺少病死率的局限性,但hACE2转基因小鼠的易 感性明显高于野生型小鼠,病理变化与SARS病人相似。这种模型的 建立对于研究SARS发病机制和抗病毒药物的评价具有重要的意义


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