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小鼠皮下肿瘤荷瘤实验细胞准备

1.     不同的细胞成瘤能力不同,在选择时应根据实验目的和具体情况综合考虑。如乳腺癌细胞系MCF-7虽然经常用于体外实验,但成瘤虑差,生长慢,因此一般不考虑。

2.     一般分为鼠源的和人源的细胞系,鼠源的一般更容易成瘤,但人源的更贴近人类肿瘤生长情况。

3.     取冻存于液氮的肿瘤细胞复苏并扩增,确保肿瘤细胞的活力和较好的生长状态。一般鼠源肿瘤细胞接种2-100万/只,人源的细胞系需要200-1000万/只以上。可结合细胞和裸鼠的实际情况,最高可以注射1000万/0.1ml,不可再高,因为细胞几乎达到饱和状态。

注意计算好细胞用量,一般要多准备5只裸鼠左右细胞用量。

小鼠皮下肿瘤荷瘤实验裸鼠准备

一般选择5-6w龄的裸鼠,太小死亡率太高,太大免疫力会增强,不易成瘤。如无特殊要求雌雄均可。

接种步骤

1.     胰酶消化细胞,计数后将其重悬于生理盐水中

2.     选择进针部位(一般选择腋下或腹股沟等血管丰富的部位),用酒精棉球擦拭进针部位

3.     向前方穿行,注射前针头左右动一下,若无阻力则证明在皮下,否则可能在皮内或肌肉里面

4.     缓慢推注,一般体积为100-150μL,注射完后缓慢拔出针头,可在注射部位看到明显的鼓包

5.     接种点离进针点尽量远一些,防止漏液和污染

结果处理

一般接种5天后即可看到肿瘤出现,根据实验要去的生长天数,达到时间后颈椎脱臼处死裸鼠,取出肿瘤,拍照。拍照时需要放置两把直尺,可用于后期计算肿瘤体积。


问题解答:

(1)瘤子长不出来是怎么回事?

一方面可能是细胞状态差,活力不好,或是肿瘤细胞不易成瘤,需加入Matrigel辅助或增大接种量或更换细胞系;一方面可能是小鼠周龄太大,或小鼠免疫排斥,建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠(Nod-scid小鼠,NOG小鼠>Nude裸鼠)

(2)小鼠瘤子长起来又消失?

肿瘤块先缩小,后变大很常见,很可能是炎症反应,肿瘤细胞被小鼠自身吸收,继续观察肿瘤细胞吸收之后是否经过几周还能长出来,长不起来建议换鼠。

(3)均一性很差,肿瘤体积差距较大?

如果荷瘤分组发现小鼠肿瘤体积差距很大,这可能跟小鼠周龄及接种细胞量不一致导致,建议重新做实验分组。

(4)是否可以在一只小鼠进行多个点荷瘤?

不可以,一只老鼠就只能接种一个点。因为一个老鼠身上有多个肿瘤块的情况下,可能会相互影响。

(5)是否应用免疫抑制剂加速肿瘤生长?

如果裸鼠荷瘤不生长,可以参考文献,用免疫抑制剂如环磷酰胺(抑制裸鼠NK细胞活性)促进生长;不过最好不要为了缩短造模周期来加速生长,因为可能会造成溃烂,这样就不得不中止实验。所以一般情况下,应尽量符合细胞系本身的生长特性,不应过多地人为的干扰。



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